เนื้อหา
Agarose gel electrophoresis เป็นกระบวนการทางวิทยาศาสตร์ที่ใช้ในโครงการวิจัยและวินิจฉัยที่เกี่ยวข้องกับการศึกษากรดนิวคลีอิก อนุญาตให้นักวิทยาศาสตร์หรือช่างเทคนิคแยกโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกที่มีประจุเช่น DNA ตามขนาดของมันและใช้ในการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ที่เกิดจากการทดลองเช่นปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส มันถูกใช้เป็นประจำเพราะมันมีราคาไม่แพงในการดำเนินการกระบวนการที่รวดเร็วและช่วยให้การกู้คืนของกรดนิวคลีอิกถูกวิเคราะห์
การทำเจล
รวบรวมรายการที่จำเป็นทั้งหมดและทำความสะอาดด้วยเอทานอล 70% รายการรวมถึงถาดเจลหล่อเทปกาว agarose เกรดห้องปฏิบัติการขวดหรือถังความเข้มข้น 10x (Tris-Borate-EDTA, TBE) บัฟเฟอร์ทำงาน TBE, ethidium โบรไมด์, สีย้อมและตัวอย่างที่จะวิเคราะห์ ตรวจสอบให้แน่ใจด้วยว่าคุณมีอ่างเก็บน้ำเจลอิเล็กโตรโฟเรซิสและแหล่งพลังงาน Agarose จัดทำขึ้นโดยการชั่งน้ำหนักเทป DNA ที่เหมาะสมเพื่อทำการวิเคราะห์ผสมกับบัฟเฟอร์ TBE และละลายในไมโครเวฟ โดยทั่วไปการแก้ปัญหา 1% ถึง 2% นั้นเพียงพอที่จะครอบคลุมดีเอ็นเอหลายเส้นที่ศึกษาในอณูชีววิทยารายวัน DNAs ขนาดเล็กต้องการเจลที่มีความเข้มข้นมากกว่าในขณะที่ขนาดใหญ่จะต้องการเจลที่เจือจางมากกว่า สารละลาย agarose ผสมกับ ethidium bromide ซึ่งจะจับกับกรดนิวคลีอิกในระหว่างกระบวนการอิเลคโตรโฟรีซิส วิธีการแก้ปัญหานี้ถูกเทลงในถาดละลายของเจลเช่นเดียวกับที่ใส่หวีปั้นและส่วนผสมที่เหลือจะแข็งตัว
ใส่และเปิดใช้งานเจล
เจลจะถูกลบออกจากถาดและแช่ในอ่างเจลอิเล็กโทรโฟเรซิสที่บรรจุบัฟเฟอร์การวิ่ง ตัวอย่างที่นำมาวิเคราะห์นั้นจะผสมกับสีย้อมและวางลงในหลุมในเจลที่สร้างโดยหวี เครื่องหมายหรือสเกลรวมอยู่ด้วยเพื่อให้ผู้ตรวจสอบเห็นความคืบหน้าของอิเล็กโตรโฟรีซิสและกำหนดขนาดของชิ้นส่วนที่สร้างขึ้น จากนั้นกระแสไฟฟ้าจะถูกนำไปใช้กับเจลซึ่งบังคับให้ตัวอย่างย้ายจากปลายด้านหนึ่งของเจลไปยังอีกด้านหนึ่ง ในระหว่างกระบวนการนี้กรดนิวคลีอิกในตัวอย่างจะแยกออกเป็นชิ้นส่วนขนาดต่าง ๆ โดยมีโมเลกุลขนาดใหญ่เข้ามาใกล้บ่อน้ำและโมเลกุลขนาดเล็กกว่าจะเคลื่อนที่ไปที่ปลายอีกด้านของเจล
วิเคราะห์เจล
หลังจากยุติกระบวนการอิเล็กโตรโฟรีซิสเจลจะถูกลบออกจากอ่างเก็บน้ำและวางไว้ใน UV transilluminator ซึ่งส่องสว่างชิ้นส่วนของกรดนิวคลีอิกที่จับกับฟลูออไรด์เอธิดูเนียม ภาพถ่ายนี้เสร็จสิ้นและแถบของกรดนิวคลีอิกสามารถวัดได้ตามระยะทางที่อพยพผ่านเจล เครื่องชั่งจะแยกเป็นวงขนาดที่รู้จักและสามารถใช้เป็นแนวทางในการวิจัยในระหว่างการวิเคราะห์